Охратоксин, вырабатываемый грибками плесени Aspergillus ochraceus и Penicillium viridicatum встречается в кукурузе, ячмене, зеленом кофе и различных сухофруктах. Охратоксин может присутствовать совместно с афлатоксином, одним из самых сильнодействующих природных канцерогенов. Охратоксин также относится к потенциальным канцерогенам.
Методика анализа:
Экстракция:
1. Смешать 10 грамм размолотого образца и 40 мл 50% метанола (70% метанол для пшеницы, ячменя, овса и рисовой муки) и интенсивно перемешивать в течение 3 минут.
2. Отфильтровать экстракт, пропустив не менее 5 мл через фильтровальную бумагу или через шприцевой фильтр Neogen (#9420).
3. Образец готов к анализу.
Анализ:
Перед началом анализа необходимо провести экстракцию образцов.
1. Добавить по 100 мкл коньюгата в лунки.
2. Добавить по 100 мкл контрольных и исследуемых образцов.
3. Перемешать. Перенести по 100 мкл в лунки с антителами. Инкубировать 5 минут.
4. Слить жидкость из лунок.
5. Промыть лунки дистиллированной водой и удалить оставшуюся воду с помощью фильтровальной бумаги.
6. Добавить по 100 мкл субстрата в лунки. Можно использовать 12-канальный дозатор. Инкубировать 5 минут.
7. Добавить по 100 мкл стоп-буфера в лунки.
8. Используя спектрофотометр, определить оптическую плотность при длине волны 650 нм и рассчитать концентрацию микотоксина.
- Время экстракции – 3-5 минут
- Время анализа – 2 инкубации по 10 минут
- Единый объём дозирования всех реагентов – 100 мкл
- Нет необходимости в термостате
|
Хранение:
|
2-8 °C
|
|
Количество лунок:
|
48
|
|
Стандарты:
|
0, 2, 5, 10 и 25 ppb
|
|
Экстракция:
|
50% метанол (70% метанол для пшеницы, ячменя, овса и рисовой муки)
|
|
Детектирование:
|
При длине волны 650 нм
|
|
Предел детектирования:
|
1 ppb
|
|
Предел количественного обнаружения:
|
2 ppb
|
|
Диапазон количественного обнаружения:
|
2–25 ppb (при необходимости количественного анализа образцов, содержащих более 25 ppb необходимо разбавить образец)
|
|
Валидированные продукты:
|
абрикосы, ячмень*, кукуруза, финики, фиги, зеленый кофе, овес*, овсяная мука, волокна овса*, волокна гороха, попкорн, картофель (белый), изюм, рис, рисовая мука*, рисовый глютен, рисовые волокна, рожь, соевый гидролизат, соевые бобы, мука из соевых бобов, мука из подсолнечника, тапиока, пшеница* пшеничные отруби
* Необходима экстракция 70% метанолом
|
