Токсины Т-2/HT-2 – это трихотеценовые микотоксины, выделяемые некоторыми видами дрожжей Fusarium. Поскольку токсин T-2 быстро превращается в токсин HT-2, и показано, что оба микотоксина обладают множеством негативных воздействий на большое количество животных, их часто анализируют вместе.
Методика анализа:
Экстракция:
1. Смешать 5 грамм размолотого образца и 25 мл 70% метанола и интенсивно перемешивать в течение 3 минут.
2. Отфильтровать экстракт, пропустив не менее 5 мл через фильтровальную бумагу или через шприцевой фильтр Neogen (#9420).
3. Разбавить фильтрат 1:1 (например, 1 мл к 1 мл) деионизированной или дистиллированной водой и перемешать.
4. Образец готов к анализу.
Анализ:
Перед началом анализа необходимо провести экстракцию образцов.
1. Добавить по 100 мкл коньюгата в лунки.
2. Добавить по 100 мкл контрольных и исследуемых образцов.
3. Перемешать. Перенести по 100 мкл в лунки с антителами. Инкубировать 5 минут.
4. Слить жидкость из лунок.
5. Промыть лунки дистиллированной водой и удалить оставшуюся воду с помощью фильтровальной бумаги.
6. Добавить по 100 мкл субстрата в лунки. Можно использовать 12-канальный дозатор. Инкубировать 5 минут.
7. Добавить по 100 мкл стоп-буфера в лунки.
8. Используя спектрофотометр, определить оптическую плотность при длине волны 650 нм и рассчитать концентрацию микотоксина.
- Время экстракции – 3-5 минут
- Время анализа – 2 инкубации по 2 и 3 минуты
- Единый объём дозирования всех реагентов – 100 мкл
- Нет необходимости в термостате
|
Хранение:
|
2-8 °C
|
|
Количество лунок:
|
48
|
|
Стандарты:
|
0, 25, 50, 100 и 250 ppb
|
|
Экстракция:
|
70% метанол
|
|
Детектирование:
|
При длине волны 650 нм.
|
|
Предел детектирования:
|
< 10 ppb токсина T-2 или HT-2 или их суммы
|
|
Предел количественного обнаружения:
|
25 ppb
|
|
Диапазон количественного обнаружения:
|
25 - 250 ppb (при необходимости количественного анализа образцов, содержащих более 250 ppb необходимо разбавить образец)
|
|
Валидированные продукты:
|
ячмень, кукуруза, овес, рис, рожь, соя и пшеница
|
