Обычно зеараленон вырабатывается плесневым грибком Fusarium graminearum, который также вырабатывает дезоксиниваленол (ДОН). Таким образом, если в пробе обнаружен зеараленон, то велика вероятность присутствия и других микотоксинов плесневых грибков фузарий. Зеараленон относится к эстрогенным микотоксинам, поскольку часто вызывает эстрогенную реакцию у животных.
Методика анализа:
Экстракция:
1. Смешать 5 грамм размолотого образца и 25 мл 70% метанола и интенсивно перемешивать в течение 3 минут.
2. Отфильтровать экстракт, пропустив не менее 5 мл через фильтровальную бумагу или через шприцевой фильтр Neogen (#9420).
3. Разбавить фильтрат 1:5 водой, смешав 1 мл экстракта образца с 4 мл дистиллированной воды в чистой пробирке для разбавления образца.
4. Образец готов к анализу.
Анализ:
Перед началом анализа необходимо провести экстракцию образцов.
1. Добавить по 100 мкл коньюгата в лунки.
2. Добавить по 100 мкл контрольных и исследуемых образцов.
3. Перемешать. Перенести по 100 мкл в лунки с антителами. Инкубировать 5 минут.
4. Слить жидкость из лунок.
5. Промыть лунки дистиллированной водой и удалить оставшуюся воду с помощью фильтровальной бумаги.
6. Добавить по 100 мкл субстрата в лунки. Можно использовать 12-канальный дозатор. Инкубировать 5 минут.
7. Добавить по 100 мкл стоп-буфера в лунки.
8. Используя спектрофотометр, определить оптическую плотность при длине волны 650 нм и рассчитать концентрацию микотоксина.
- Время экстракции – 3-5 минут
- Время анализа – 2 инкубации по 5 минут
- Единый объём дозирования всех реагентов – 100 мкл
- Нет необходимости в термостате
|
Хранение:
|
2-8 °C
|
|
Количество лунок:
|
48
|
|
Стандарты:
|
0, 25, 75, 150 и 500 ppb
|
|
Экстракция:
|
70% метанол
|
|
Детектирование:
|
При длине волны 650 нм
|
|
Предел детектирования:
|
10 ppb
|
|
Предел количественного обнаружения:
|
25 ppb
|
|
Диапазон количественного обнаружения:
|
25 - 500 ppb (при необходимости количественного анализа образцов, содержащих более 500 ppb необходимо разбавить образец)
|
|
Валидированные продукты:
|
ячмень, кукуруза, кукурузно-глютеновая мука*, кукурузный силос, сухая послеспиртовая барда*, овес, овсяная мука, шелуха овса*, овес (чищенный), волокна гороха, корма для домашних питомцев*, попкорн, картофель, рис, рис (коричневый), рисовая мука (белая), рисовая шелуха, рожь, мука соевых бобов, тапиока, пшеница, пшеничная крупка*
|
|
*Обычно кислые и могут требовать нейтрализации pH
|
